抗體或蛋白如何保存？

抗體或蛋白作為蛋白質(zhì)試劑，保存條件是非常重要的。只要條件得當(dāng)，抗體或蛋白一般都可以保存幾個(gè)月到幾年。

保存溫度

對(duì)于我們的大部分抗體或蛋白而言，分裝為小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的長(zhǎng)期保存條件。此外，在收到抗體或蛋白后，也可暫時(shí)保存至4℃冰箱中，短期保存時(shí)間為1-2周。也有一小部分抗體或蛋白適合長(zhǎng)期保存于4℃冰箱。

分裝前應(yīng)先離心沉降掛在管壁和管蓋上的抗體或蛋白，分裝量取決于您的實(shí)驗(yàn)常用量，但建議不能少于10μl，以避免蒸發(fā)等帶來(lái)的干擾。分裝后的抗體或蛋白試劑應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，可短時(shí)間（1-2周）保存于4℃冰箱中。

反復(fù)凍融可能使抗體或蛋白變性，導(dǎo)致抗體或蛋白形成聚集體，從而降低其結(jié)合能力。對(duì)大部分抗體或蛋白而言，在-20 ℃下保存就已足夠；在-80 ℃下保存并無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)。保存抗體或蛋白要避免使用無(wú)霜冰箱，因?yàn)閮鋈谘h(huán)（用于減少霜的形成）會(huì)造成抗體或蛋白反復(fù)凍融而失活。

部分抗體或蛋白試劑中會(huì)加入終濃度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液狀態(tài)，從而降低凍融損傷。此類抗體或蛋白產(chǎn)品請(qǐng)勿儲(chǔ)存于-80℃冰箱中，否則仍會(huì)凝固。值得注意的是，抗體或蛋白在加入甘油后容易被細(xì)菌污染，操作時(shí)應(yīng)小心，確保無(wú)菌。

以下是一些需要注意的常見特例：

部分酶偶聯(lián)抗體或蛋白，需要保存在 4 ℃，這些抗體或蛋白經(jīng)歷凍融不僅會(huì)影響抗體或蛋白的結(jié)合能力，還會(huì)降低酶活性。
偶聯(lián)抗體或蛋白（無(wú)論是偶聯(lián)有熒光染料、酶還是生物素）應(yīng)盡量保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會(huì)影響偶聯(lián)物的活性。熒光偶聯(lián)物尤其容易發(fā)生光致漂白，因此在實(shí)驗(yàn)各階段都應(yīng)避光。
IgG3 同型抗體或蛋白的獨(dú)特之處在于其解凍后容易形成聚集體，因此應(yīng)始終保存在 4 ℃。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后應(yīng)盡快凍存。
 

防止降解

抗體或蛋白試劑稀釋至工作濃度后，建議及時(shí)使用，不建議對(duì)稀釋后的抗體或蛋白進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間保存。如果必須保存，建議保存于4℃并于一周以內(nèi)使用。一般而言，蛋白質(zhì)濃度高于1mg/ml時(shí)更不容易降解，因此部分抗體或蛋白試劑中加入了牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來(lái)防止降解。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體或蛋白結(jié)合到容器壁上造成的損失。

需要注意的是，請(qǐng)勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體或蛋白中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)穩(wěn)定劑會(huì)與抗體或蛋白競(jìng)爭(zhēng)，降低偶聯(lián)效率。

防止污染

為了防止微生物污染，可將疊氮化鈉作為抗菌劑加入抗體或蛋白工作液中，保持最終濃度為 0.02% (w/v)。阿拉丁的多款抗體或蛋白中都含有疊氮化鈉，濃度范圍為 0.02%-0.05%。抗體或蛋白數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對(duì)此有說(shuō)明。

此外，如果要對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理，或進(jìn)行體內(nèi)研究時(shí)，請(qǐng)務(wù)必使用不含疊氮化鈉的試劑。抗菌劑會(huì)阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)，對(duì)大部分生物體都有毒害作用。

高濃度的疊氮化鈉會(huì)干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng)，因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之前將其去除。或可選用0.01%硫柳汞鈉（硫柳汞），這種抗菌劑不含伯胺。

抗體或蛋白溶液中的疊氮化鈉可通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da（IgM 約為 600,000 Da），疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微透析裝置可去除疊氮化鈉。

透析過(guò)程在燒杯中（置于磁力攪拌器上，溫度保持 4 ℃）進(jìn)行，每毫升抗體或蛋白使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS，攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次，每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌，并且應(yīng)在無(wú)菌條件下處理所得制備物。